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產品介紹
Protein A是一種發現於金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的細胞壁表面蛋白,分子量為42 kDa;Protein G是C型或G型鏈球菌(Streptococcal bacteria)表達的免疫球蛋白結合蛋白;Protein A和Protein G功能相似,能特異性地與哺乳動物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)結合;經重組改造的Protein A、G與凝膠以一定的方式結合,可用於免疫沈澱或抗體的純化;Protein A凝膠適合於結合human IgG1、IgG2、IgG4,mouse IgG2a、IgG2b等,而Protein G凝膠適合於結合human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4,mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3,rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c等多克隆抗體(具體信息見附表一)。
本產品采用Servicebio自主研發生產的Protein G蛋白標記磁珠,與市場上同類產品相比,該產品結合抗體效率更高,非特異性結合率更低,配合優化後的緩沖液,可便捷高效的進行免疫沈澱實驗;可廣泛應用於細胞裂解物、細胞分泌上清、血清、腹水等樣品中目標蛋白的分離與純化。
特點 |
描述 |
產品內容 |
50%(v/v) agarose in specific protective buffer |
類型 |
6% agarose cross-linked agarose |
偶聯蛋白 |
Protein G |
偶聯蛋白分子量 |
~25 kDa(Protein G) |
結合蛋白能力 |
>1mg小鼠抗體 /ml |
特異性 |
來自不同物種的抗體,包括小鼠、人源、大鼠、山羊、棉羊、牛 |
尺寸 |
30~150 μm |
洗脱方法 |
酸洗或 1x SDS‐PAGE loading buffer (reduced)洗脫 註意:如果使用 1x SDS‐PAGE loading buffer (reduced)洗脫,抗體的重鏈(~50 kDa)和輕鏈(~25 kDa)會從磁珠上變性釋放出來 |
應用 |
蛋白免疫沉澱,蛋白純化 |
內容物
Component Number |
Component |
G2206-1ML |
G2206-5ML |
G2206 |
SweAgrose Protein G Antibody Purified agarose |
1 mL |
5 mL |
Manual |
1pc |
實驗步驟
1. 實驗開始前的準備:
抗體純化相關試劑配方參考如下,用戶可根據具體實驗情況自行調整
Component |
Reagent combination |
Binding Wash Buffer |
PBST:137 mM NaCl,2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20 |
Elution Buffer |
100 mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.5 |
Neutralization Buffer |
1.0 M Tris-HCl, pH 9.0 |
Preservation Buffer |
PBST,0.1% (v/v) Proclin 300 |
手動操作步驟(以純化小鼠腹水IgG為例)
1. 樣本處理:取腹水樣本500 μL,不足的加入結合洗滌液補足500 μL,若樣本中有較多蛋白沈澱離心後取上清進行實驗,可提高抗體純度;
2. 磁珠預處理:將抗體純化磁珠渦旋振蕩30 s,使其充分重懸,取100 μL 50%(v/v) SweAgarose Protein G抗體純化磁珠置於另一新1.5 mL EP管中,6000×g在4℃離心30s,吸除上清,用1 mL結合洗滌液洗滌2次,離心分離後棄上清;
注意:磁珠量可根據樣本中抗體含量調節;
3. 抗體吸附:向步驟2磁珠中加入步驟1處理的樣本,渦旋混勻,在室溫下(約25℃)置於翻轉混合儀或者手動輕柔翻轉EP管,使凝膠與樣本充分接觸,翻轉15 min後,6000×g在4℃離心30s,吸除上清液;
4. 磁珠洗滌:向EP管中加入1 mL結合洗滌液,振蕩重懸後,6000×g在4℃離心30s,棄上清,重覆操作3次;
5. 抗體洗脫:在上述完成磁珠洗滌的EP管中加入 0.5~1.0 mL洗脫液,用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸,然後在室溫下(約25℃)置於翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉EP管,翻轉10 min後,6000×g在4℃離心30s,收集上清液至新的EP管。
6. 抗體中和:在步驟5抗體洗脫液中加入一定量的中和液,一般為抗體洗脫體積的1/10(例如抗體洗脫液為500 μL,則中和液的添加量為50 μL),最終使洗脫的抗體pH 值保持中性環境,以利於維持抗體的生物活性,避免抗體失活;
7. 磁珠後處理:使用後的磁珠用洗脫液洗滌2次,,6000×g在4℃離心30s,棄上清液;接著用結合洗滌液洗滌3次,,6000×g在4℃離心30s,棄上清液,加入200 µL保存液重懸磁珠,置於2~8℃保存。
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