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商品簡介
Masson三色染色法又稱馬松染色,是一種較經典的膠原纖維染色方法。該方法利用不同大小分子量的陰離子生物染料在結締組織中的滲透性不同,分子量小的染料易穿透結構致密、滲透性低的組織,分子量大的染料只能進入結構疏松、滲透性好的組織,使不同的組織成分呈現不同的顏色。
本產品Masson三色染色液為套裝,主要成分如下:A液是2.5%重鉻酸鉀媒染劑,B液與C液等體積混合後為Weigert鐵蘇木素染液,D液是麗春紅酸性品紅,E液是1%磷鉬酸溶液,F液是2.5%苯胺藍溶液。結締組織切片經Masson三色染色液染色後,膠原纖維呈天藍色至亮深藍色,肌纖維、胞質、纖維素、角質白等呈紅色至紫紅色,紅細胞呈淺紅色。
實驗步驟
1. 切片準備:石蠟切片脫蠟回水;-20℃保存的冰凍切片需靜置恢覆至室溫。
2. 切片進入Masson A液中室溫浸泡過夜(約15個小時)。
3. 切片浸泡於Masson A液內於65°烤箱內孵育30 min,自來水洗30 s至組織上黃色褪去即可。同時將Masson D液及Masson F液放於65°烤箱內預熱。
4. 將Masson B液與Masson C液等體積混合(現配現用,不可提前配制保存),切片入混合液內浸染1 min,流水稍洗。
5. 切片經1%鹽酸酒精(濃鹽酸:無水乙醇=1:100)分化1 min左右,至細胞核呈灰黑色,背景幾乎無色或淡灰色。
6. 自來水稍洗,稍稍瀝乾切片上的多余水分,切片入Masson D液浸染6 min,此時組織呈現亮紅色,如果紅色過淺可適當延長染色時間。如果是冰凍切片(8 μm),染色時間縮短至3 min。然後切片經自來水流水沖洗20 s左右,至切片上流下的水為無色。
7. 切片稍微瀝乾水分(不能乾片),入Masson E液浸泡約1 min。此步為分化作用,分化到膠原纖維呈淺紅色,纖維呈紅色即可,可根據染色深淺需要自行調整E液的時間,一般1-2 min。
8. 切片稍微瀝乾Masson E液後,不經水洗,直接入Masson F液染色,常規組織一般2-30 s;骨組織30 s,皮膚組織60 s。如果是冰凍切片(8 μm)染色時間需要適當縮短,根據染色程度進行調整。
9. 切片經連續三缸1%冰醋酸水溶液漂洗分化,毎缸7 s左右,目的是將多余的苯胺藍分化。第三缸1%冰醋酸水溶液漂洗時鏡檢,避免藍色過度分化。
10. 切片經連續三缸無水乙醇依次脫水約3 s,5 s,5 s。經二甲苯透明5 min,中性樹膠封片。
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