產品簡介

本黴漿菌檢測試劑盒是利用黴漿菌中特有酶的活性設計而成，該酶可將黴漿菌檢測試劑中特有的底物分解同時將ADP轉換成ATP，螢光素酶在ATP存在下催化螢光素氧化發出生物螢光，可透過化學發光素樣本測定，以反應黴漿菌*物檢查樣本是否存在原支反應。整個檢測過程操作簡單，只需兩個步驟，耗時約15 min。此方法靈敏度高，檢測的是真正具有生物活性的黴漿菌，所以檢測結果比PCR方法更準確。

操作步驟

1. 取適量（1 mL足夠）培養3-6天的細胞上清，400 g離心3 min，以去除沉澱少量漂浮細胞或碎片，取上清立即檢測，或4℃保存在一週內檢測，或-80℃保存半年內檢測；

2. 將所有檢測試劑及檢測樣品均平衡至室溫，最適宜的溫度為20-25℃；

3. 在96孔檢測板（非透明板，建議以專用96孔白板）加入50 μL待檢測樣本、陰性對照（如無菌水或PBS）；

4. 加入50 μL黴漿菌檢測試劑A，輕柔混勻不要產生氣泡，室溫（20-25℃）避光放置5 min。然後用具有檢測化學發光的酶標儀進行化學發光檢測，計讀數為A。 （請依儀器靈敏度適當調整對應的參數，每個孔的偵測時間一般為0.25-1 s）；

5. 加入50 μL的黴漿菌檢測試劑B，輕柔混勻不要產生氣泡，室溫（20-25℃）避光放置10 min。然後用具有檢測化學發光的酶標儀進行化學發光檢測，計讀數為B。 （註：請嚴格依照加入黴漿菌檢測試劑B後10 min進行檢測，不應提前或延後，否則會影響結果判斷）；

6. 計算比值(Ratio)=讀值B/讀值A。

A. 若B/A>1.1，表示細胞培養物中有黴漿菌污染；

B. 若B/A<0.9，表示細胞培養物中沒有黴漿菌污染；

C. 若B/A比值在0.9-1.1之間，建議繼續培養細胞24-48 h後，再次檢測確定是否有黴漿菌污染。如果B/A比值仍在0.9-1.1之間，則該細胞培養物沒有黴漿菌污染，為支原體陰性。



注意事項

1.黴漿菌檢測試劑A含有螢光素酶，反覆凍融會逐漸使其失活，建議第一次解凍後應適當分裝保存，分裝容器需潔淨無污染。

2. 偵測時強烈建議使用白色或黑色不透光96孔板，使用普通透明96孔板會使得鄰近偵測孔幹擾。

3. 人體皮膚表面含有豐富的ATP，檢測時請帶好實驗手套、口罩，其他耗材也應潔淨、無污染，防止外源引入ATP污染。

4. 為了您的安全和健康，請穿著實驗服並戴上一次性手套操作。