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Servicebio Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit
商品編號：G4305-48T
谷胱甘肽（谷氨酰-半胱氨酰-甘氨酸）是一種由3個氨基酸殘基組成的小肽，廣泛存在於機體中。谷胱甘肽以還原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）兩種不同的形式存在，並且可以在一定條件下互相轉換。GSH是動物細胞中重要的抗氧化劑，且是絕大多數細胞巰基的主要來源。在生理條件下，由於GSSG會被谷胱甘肽還原酶酶促還原，因此，GSH是機體內主要存在形式。
Servicebio Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit根據還原型谷胱甘肽可與DTNB反應產生TNB和GSSG的原理，TNB是一種黃色產物，通過測量其在412 nm的吸光度，就能有效確定樣品GSH含量。
2 GSH+DTNB
GSSG+2 TNB實驗步驟
1. 樣品準備：
1.1. 樣品前處理
1.1.1. 血漿、血清樣本：將樣品與蛋白去除試劑1:4（例如50 μL血清：200 μL蛋白去除試劑）充分混勻；4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清用於後續還原型谷胱甘肽檢測；
1.1.2. 組織樣本：使用合適的緩沖液（PBS、生理鹽水等）進行勻漿裂解，其中組織和生理鹽水的比例為1比9（0.1g：0.9mL）即可；勻漿裂解後，4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清與蛋白去除試劑1:1，充分混勻；4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清用於後續還原型谷胱甘肽檢測；
1.1.3. 細胞樣品：細胞收集後，可使用合適的緩沖液重懸細胞，大約每大約每1 X 106個細胞加300-500 μL PBS或生理鹽水；勻漿處理後，4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清與蛋白去除試劑1:1，充分混勻；4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清用於後續還原型谷胱甘肽檢測；
1.2. 標準品配置和準備：
1.2.1. 谷胱甘肽標準品（GSH粉末）在低速離心機上離心，確保粉末都在管底；使用500 μL無菌超純水溶解，配制成還原型谷胱甘肽標準品（1mmol/L），建議分裝後-20℃保存，1個月內用完；
1.2.2. 使用超純水對還原型谷胱甘肽標準品（1mmol/L）進行梯度稀釋（例如取其50 μL標準品加入950 μL超純水中，稀釋為50 μmol/L，並進一步梯度稀釋做標準曲線，即50/25/12.5/6.25/3.125 μmol/L），與待測樣品進行後續檢測後，用於標準曲線法數據分析。
2. 還原型谷胱甘肽檢測：
2.1. 將檢測探針和超純水1：19混合配置成檢測探針工作液（建議現配現用）；
2.2. 參考下表進行還原型谷胱甘肽檢測；
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Standard tube |
Blank tube |
Sample tube |
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Reduced Glutathione Standard |
100 μL |
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PBS or water |
100 μL |
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Samples to be tested |
100 μL |
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Reduced Glutathione Assay Buffer |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
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Detection Probe Working Solution |
20 μL |
20 μL |
20 μL |
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Shock the plate for 1 min, incubate at room temperature (25°C) for 5 min, and detect the absorbance at 412 nm using an enzyme mete |
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