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Servicebio SweScript One-Step RT-PCR Kit
商品編號：G3335-50
Servicebio SweScript One-Step RT-PCR Kit采用一步RT-PCR的方法，以RNA為模板，使用基因特異引物，在同一體系中進行反轉錄與PCR擴增，反應中途不需要添加任何試劑，只需加入RNA模板、目的基因引物及水補足體系即可，能有效降低汙染風險。本試劑盒包含SweScript One-Step RT Mix、2×One-Step PCR Master Mix，其中SweScript One-Step RT Mix包含SweScript逆轉錄酶及RNase Inhibitor。SweScript逆轉錄酶是通過體外進化篩選獲得的突變體，其RNase H活性降低，具有強的延伸能力與熱穩定性。2×One-Step PCR Master Mix包含DNA聚合酶、反應Buffer、dNTPs、Mg2+、RT-PCR反應穩定劑等，DNA聚合酶具有校準功能，反應產物為平末端，該DNA聚合酶經改造優化，大大提高擴增性能與特異性。在精心優化的反應體系及條件下，本試劑盒One-Step RT-PCR擴增產物長達8 kb。
內容物
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Component Number |
Component |
G3335-50 |
G3335-100 |
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G3335-1 |
SweScript One-Step RT Mix |
50 μL |
100 μL |
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G3335-2 |
2×One-Step PCR Master Mix |
1 mL |
2×1 mL |
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G3335-3 |
Nuclease-Free Water |
1 mL |
1 mL |
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说明书 |
1份 | ||
實驗步驟
(1) RT-PCR反應體系配制；
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Component |
Volume |
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SweScript One-Step RT Mix |
1 μL |
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2×One-Step PCR Master Mix |
25 μL |
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Gene-specific Forward Primer(10 μM) |
2 μL |
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Gene-specific Reverse Primer(10 μM) |
2 μL |
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Total RNA/mRNA |
0.1 ng-1 μg / 10 pg-0.1 μg |
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Nuclease-Free Water |
Add to 50 μL |
(2) 輕輕混勻並離心；
(3) RT-PCR反應程序設置：
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Temperature |
Volume |
Cycles |
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50℃a |
15-30 min |
1 |
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98℃ |
2 min |
1 |
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98℃ |
15 s |
35-40 |
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50-65℃b |
20 s |
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72℃ |
10 s/kb |
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72℃ |
5 min |
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a：對於高GC或覆雜模板，可將逆轉錄溫度提高至55℃。
b：退火溫度根據引物的Tm值進行調整，一般退火溫度低於Tm值的3-5℃即可。
注意事項
1. 操作時請佩戴一次性手套，避免RNase汙染。
2. 務必將SweScript One-Step RT Mix和2×One-Step PCR Master Mix置於冰上。
3. SweScript One-Step RT Mix含有高濃度甘油，使用前應短暫離心。
4. 使用本試劑盒進行反轉錄反應時必須使用特異性的反轉錄引物，Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。
5. 擴增不同的目的基因使用的RNA量不同，需要根據實際擴增情況調整模板用量。
6. 擴增5kb以上的目的基因建議使用試劑盒提取的RNA作為模板。
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