Servicebio Mouse Genotyping Kit包含小鼠尾巴、腳趾、耳朵快速裂解緩沖液和用於基因分型的PCR Mix，裂解產物無需進行基因組提取純化，可直接作為模板用於PCR擴增，操作簡便，對小鼠損傷小，只需要微量的組織樣本即可達到高效的基因分型、基因敲除檢測、轉基因鑒定等。本產品配套的2×Mouse Genotyping PCR Mix (+Dye)包含了高抗抑制性能和快速擴增的DNA Polymerase、dNTPs以及優化的緩沖體系，具有直接擴增效率高和特異性強的特點，適用於2 kb以內的目的基因擴增。
內容物
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Cat. No. |
Product Name |
Spec. |
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G3001 |
50×TAE |
500 mL |
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G3002 |
10×TBE |
250 mL |
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G3606 |
SerRed nucleic acid dye (10000×，water soluble) |
100 μL，500 μL |
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G5056 |
High purity hypotonic agarose（Agarose） |
5 g，100 g |
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G3362 |
GN8K DNA Marker |
500 μL，5×500 μL |
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G3366 |
GN100bp DNA Ladder II |
500 μL，5×500 μL |
實驗步驟
1. 製備
a) 裂解液配製：
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Component |
Spec.(1 sample) |
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Mouse Genotyping Lysis Buffer Aa |
40 µL |
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Mouse Genotyping Lysis Buffer B |
10 µL |
a. Mouse Genotyping Lysis Buffer A在低溫條件下有白色沈澱析出，使用前37℃孵育2-3min至白色沈澱消失，不影響使用。
b) 輕輕混勻，並瞬時離心；
c) 取1-3 mm的小鼠尾尖、2-3 mm直徑（打孔）小鼠耳朵或2-3 mm腳趾（不含指甲的長度），將單樣本裂解液加入到需裂解的樣本中，50℃孵育10 min，95℃孵育3 min進行充分裂解；
d) 12000 rpm離心1 min，將裂解後的組織塊離心至管底，上清可直接作為PCR反應模板。可將上清轉移至另一無菌EP，置於-20℃長期保存。
2. 推薦PCR反應體系(20 μL)：
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Component |
20 μL rxn |
Final Concentration |
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Templatea |
1-2 μL |
as required |
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Forward Primer (10 μM)b |
1 μL |
0.5 μM |
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Reverse Primer (10 μM)b |
1 μL |
0.5 μM |
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2×Mouse Genotyping PCR Mix (+Dye) |
10 μL |
1× |
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ddH2O |
Add to 20 μL |
a：模板用量不應超過反應體系的1/10。
b：引物終濃度使用範圍0.5-1.0 μM，推薦引物濃度為0.5 μM，過少的引物可能會導致擴增產量低或無擴增，過量的引物可能會導致非特異擴增。
3. 推薦PCR擴增條件：
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Step |
Temperature |
Time |
Cycles |
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Initial Denaturation |
98℃ |
2 min |
1 |
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Denaturation |
98℃ |
15 s |
35 |
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Annealing |
50-65℃ |
20 s |
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Extension |
72℃ |
10 s/kb |
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Final extension |
72℃ |
5-10 min |
1 |
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Hold |
4-16℃ |
Forever |
注意事項
1. 試劑使用前請上下輕輕顛倒混勻，請勿渦旋振蕩混勻，避免產生氣泡。
2. 每次取樣後將取樣器侵入2%次氯酸鈉溶液中反覆沖洗，避免產生不同樣本間的交叉汙染。
3. 組織應盡量剪碎，以便裂解充分。
4. Mouse Genotyping Lysis Buffer A與Mouse Genotyping Lysis Buffer B應現配現用，混合後不宜放置太長時間，否則會影響裂解效果。
5. 組織塊如果難以裂解，可將50℃裂解時間延長至20 min。
6. 裂解完成後，EP管中殘存有未完全裂解的組織塊，屬於正常現象，不影響使用。
