產品介紹

Servicebio Animal Tissue Direct PCR Kit是一款專門針對動物組織直接PCR擴增的試劑盒，適用的樣本包括新鮮或冷凍的哺乳動物內臟、指甲、毛發，斑馬魚，果蠅，培養的細胞等。試劑盒中獨特的Animal Tissue Lysis Buffer A與Animal Tissue Lysis Buffer B結合，能夠快速釋放微量組織中的基因組DNA，無需基因組提取與純化，可直接作為模板用於PCR擴增，操作簡便，減少樣品損失，極大縮短實驗耗時。裂解產物可於-20℃長期儲存。
試劑盒中配套的2×Animal Tissue Direct PCR Mix (+Dye)包含了除模板與引物外的所有組分，其中DNA Polymerase經改造後具有快速擴增和抗抑制劑的能力，PCR Mix中還含有多種反應增強劑，可進一步提高DNA Polymerase的擴增效率和特異性，可有效擴增3 kb以內的目的基因。

商品內容物

Component Number	Component	G3310-100	G3310-500
G3310-1	Animal Tissue Lysis Buffer A	5 mL	25 mL
G3310-2	Animal Tissue Lysis Buffer B	200 µL	1 mL
G3310-3	2×Animal Tissue Direct PCR Mix (+Dye)	1 mL	5×1 mL
Manual		One copy

實驗步驟

1. 裂解樣本釋放基因組DNA
a) 推薦樣本用量

Sample type	Amount
Animal visceral tissue	≤10 mg
hair	≤10 mg
finger nail	≤10 mg
Animal cells	≤103 cells

b) 裂解液配置：

Component	Lysis Solution (Single Sample)
Animal Tissue Lysis Buffer A*	50 µL
Animal Tissue Lysis Buffer B	2 µL

* Animal Tissue Lysis Buffer A在低溫條件下有白色沈澱析出，使用前37℃孵育2-3min至白色沈澱消失。

c) 輕輕混勻，並瞬時離心；

d) 根據推薦的樣本用量稱取樣本置於1.5 mL EP管中，向其中加入需要單個樣本所需裂解液，確保組織浸沒於裂解液中，離心管置於50℃孵育10 min，然後95℃孵育3 min；

e) 12000 rpm離心1 min，將裂解後的殘骸離心至管底，上清可直接作為PCR反應模板。可將上清轉移至另一無菌EP管，置於-20℃長期保存。

2. 推薦PCR反應體系(20 μL)：

Component	20 μL rxn	Final Concentration
Template *	1-2 μL	as required
Forward Primer (10 μM)#	1 μL	0.5 μM
Reverse Primer (10 μM)#	1 μL	0.5 μM
2×Animal Tissue Direct PCR Mix (+Dye)	10 μL	1×
ddH2O	Add to 20 μL

*:模板用量不應超過反應體系的1/10。

#:引物終濃度使用範圍0.5-1.0 μM，推薦引物濃度為0.5 μM，過少的引物可能會導致擴增產量低或無擴增，過量的引物可能會導致非特異擴增。

3. 推薦PCR擴增條件：

Step	Temperature	Time	Cycles
Initial Denaturation	98℃	2 min	1
Denaturation	98℃	15 s	35
Annealing	50-65℃	20 s
Extension	72℃	10 s/kb
Final extension	72℃	5-10 min	1
Hold	4-16℃	Forever

注意事項

1. 試劑使用前請上下輕輕顛倒混勻，請勿渦旋振蕩混勻，避免產生氣泡。

2. 冷凍組織應避免反覆凍融，否則會導致基因組降解，影響PCR擴增效果。

3. Animal Tissue Lysis Buffer A與Animal Tissue Lysis Buffer B應現配現用，放置過久會影響裂解效果。

4. 較難裂解的樣本，如指甲、毛發、外殼等，可將50℃裂解時間延長至20 min。

5. 裂解腸組織前，使用ddH2O清洗掉表面雜質，擴增效果更佳。

6. 裂解完成後，EP管中殘存有未完全裂解的組織塊，屬於正常現象，不影響使用。

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