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Servicebio 2×LA PCR Master Mix
商品編號：G3307-01
Servicebio 2×LA PCR Master Mix是含LA DNA聚合酶、反應緩沖液和dNTPs的2×預混液，有利於方便快速配制PCR反應體系。LA DNA聚合酶是混合酶，由經改造的Taq DNA Polymerase與一種含有3'→5'外切酶活性的DNA Polymerase組成，其保真性是Taq DNA Polymerase的6倍，擴增速度大約為10 s/kb。將快速擴增和高的持續合成能力與經特別優化的反應緩沖液結合，可從基因組中擴增長達30 kb的目的DNA片段，並且對不同來源、不同長度的模板均有較高的擴增效率，對於擴增10 kb以下的目的片段，產量明顯提高。擴增產物3′末端帶有“A”鹼基，可直接克隆於T-Vector中。本產品含有兩種示蹤染料，PCR擴增完成之後可直接點樣進行瓊脂糖凝膠電泳。
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Component |
20 μL |
50 μL |
Final Concentration |
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Templatea |
Variable |
Variable |
as required |
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Forward Primer (10 μM)b |
1.0 μL |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Reverse Primer (10 μM)b |
1.0 μL |
2.5 μL |
0.5 μM |
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2×LA PCR Master Mix |
10 μL |
25 μL |
1× |
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(DMSO, optional)c |
(0.6 μL) |
(1.5 μL) |
(3%) |
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ddH2O |
Add to 20 μL |
Add to 50 μL |
a：以質粒或噬菌體DNA為模板時，推薦添加量為10 ng-1 pg每50 μL體系；以基因組DNA為模板時，推薦添加量為250 ng-50 ng每50 μL體系；cDNA為模板時，推薦稀釋2-100倍，添加量不超過總體系的10%。過量的模板容易導致非特異擴增，過少的模板容易導致PCR擴增效率低。
b：引物終濃度使用範圍0.2-1.0μM，推薦引物濃度為0.4μM，過少的引物可能會導致擴增產量低或無擴增，過量的引物可能會導致非特異擴增。
c：高GC模板可在反應體系中額外添加不超過總體積10%的DMSO。
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Step |
Temperature |
Volume |
Cycles |
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Initial Denaturationa |
95℃ |
30-120 s |
1 |
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Denaturation |
95℃ |
5-10 s |
25-35 |
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Annealingb |
50-72℃ |
10-30 s |
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ExtensionC |
72℃ |
5-15 s/kb |
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Final extension |
72℃ |
5-10 min |
1 |
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Hold |
4-16℃ |
Forever |
a：預變性時間30 s適用於大多數常規模板，覆雜模板可延長變性時間至2 min。
b：短的變性時間有利於20 kb以上的長片段擴增。
c：對於覆雜模板，含兼並引物的擴增，退火時間可延長至30s；當退火溫度在68~70℃之間時，將退火/延伸溫度合並為退火溫度，可以顯著提高擴增特異性。
d：質粒等簡單模板推薦延伸速度5-10 s/kb；常規基因組模板推薦延伸速度10-15 s/kb；覆雜模板15-30 s/kb。
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