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Servicebio 2×Fast High Fidelity PCR Master Mix
商品編號：G3306-01
Servicebio 2×Fast High Fidelity PCR Master Mix為即用型PCR預混液，含改造後的超高保真度DNA聚合酶、dNTPs和優化的PCR反應緩沖液，濃度為2×。PCR擴增時只需加入模板、引物和ddH2O，使Mix溶液的濃度為1×即可進行PCR反應。擴增能力強，擴增速度快，延伸速度可達5-15 s/kb，具有超高保真性，保真度是Taq DNA Polymerase的50倍，Pfu DNA Polymerase的6倍，擴增產物為平末端。產品中已經添加了Loading Dye，擴增產物可直接用於瓊脂糖凝膠電泳檢測。本產品適用於常規PCR，菌落PCR，覆雜模板及高GC含量模板的PCR擴增。
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Component |
20 μL |
50 μL |
Final Concentration |
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Template(a) |
Variable |
Variable |
as required |
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Forward Primer (10μM)b |
0.8μL |
2μL |
0.4μM |
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Reverse Primer (10μM)c |
0.8μL |
2μL |
0.4 μM |
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2×Fast High Fidelity PCR Master Mix |
10μL |
2μL |
1× |
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(DMSO, optional)c |
(0.6μL) |
(1.5μL) |
(3%) |
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ddH2O |
Add to 20μL |
Add to 50μL |
a：以質粒或噬菌體DNA為模板時，推薦添加量為10 ng-1 pg每50 μL體系；以基因組DNA為模板時，推薦添加量為250 ng-50 ng每50 μL體系；cDNA為模板時，推薦稀釋2-100倍，添加量不超過總體系的10%。過量的模板容易導致非特異擴增，過少的模板容易導致PCR擴增效率低。
b：引物終濃度使用範圍0.2-1.0 μM，推薦引物濃度為0.4 μM，過少的引物可能會導致擴增產量低或無擴增，過量的引物可能會導致非特異擴增。
c：高GC模板可在反應體系中額外添加不超過10%的DMSO。
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Step |
Temperature |
Volume |
Cycles |
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Initial Denaturationa |
98℃ |
30 s |
1 |
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Denaturation |
98℃ |
15-30 s |
25-35 |
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Annealingb |
50-72℃ |
15-30 s |
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Extensionc |
72℃ |
5-15 s/kb |
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Final extension |
72℃ |
5-10 min |
1 |
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Hold |
4-16℃ |
Forever |
a：預變性時間30 s適用於大多數常規模板，覆雜模板可延長變性時間至2 min。
b：對於覆雜模板，含兼並引物的擴增，退火時間可延長至30 s。\
c：質粒等簡單模板推薦延伸速度5-10 s/kb；常規基因組模板推薦延伸速度10-15 s/kb；覆雜模板15-30 s/kb。
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