產品描述
抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）是破骨細胞的特徵性酶，特異性分佈於破骨細胞。 TRAP染色試劑盒用於組織中破骨細胞的可視化。其基本原理是，在含有酒石酸的酸性條件下，抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP可水解萘酚AS-BI磷酸酯，生成的萘酚AS-BI與六唑-副玫瑰苯胺結合，形成不溶於水的酒紅色物質，沉積在酶激活的原位位點，從而實現抗酒石酸酸性磷酸酶的色譜分離和定位。

本產品的基本組成：反應緩衝液的主要成分為乙酸緩衝液和酒石酸鉀鈉，pH值約為5.0；副玫瑰苯胺溶液，含有副玫瑰苯胺；亞硝酸鈉溶液的主要成分為4%亞硝酸鈉；AS-BI磷酸鹽底物溶液，主要成分為20 mg/mL萘酚AS-BI磷酸鹽。使用本產品染色後，破骨細胞的TRAP呈現酒紅色，並定位於細胞質中。根據每塊組織切片上樣量300 μL計算，該試劑盒可進行50次以上的TRAP染色。

實驗步驟

實驗前準備

製備TRAP工作液：

（1）取50 μL副玫瑰苯胺溶液（G1050-2）和50 μL亞硝酸鈉溶液（G1050-3），在乾淨的離心管中混合，得到六唑-副玫瑰苯胺溶液；

（2）將 100 μL AS-BI 磷酸鹽底物溶液（G1050-4）加入步驟 1 中的 100 μL 六唑-副玫瑰苯胺溶液中，並吹吸幾次直至完全混合；

（3）吸收1.8 mL反應緩衝液（G1050-1），並加入步驟2的混合溶液中，充分混合；

（4）將步驟 3 中的混合液體透過針式過濾器（0.45 μm 流式過濾膜）過濾，得到 TRAP 工作液。

注意：務必依序配製工作液。 每個組織點大約需要 200-300 μL 工作液，應根據所用組織量配製，並按需使用，以免浪費。

石蠟切片程序（供參考）

1. 將石蠟切片脫蠟至水狀，並在純水中洗滌數分鐘。

2. 將切片放入裝有一定量純水的組織化學筆圈中（以防止切片乾燥），置於濕盒中，在 37℃ 下用純水孵育 2 小時。

3. 將切片孵育後，倒掉純水，加入過濾後的TRAP工作液覆蓋組織，並在37℃黑暗條件下孵育20-30分鐘。

4.（可選，自行配製試劑）將細胞核進行複染：倒入培養液，用蘇木精染料溶液洗滌，對細胞核進行染色。

5.脫水、透明，並用中性樹膠密封。

細胞載玻片操作流程（供參考）

1. 細胞固定：吸除細胞培養基，加入 4% 多聚甲醛（建議 G1101），固定 15-30 分鐘，然後用蒸餾水沖洗 3 次。

2. 細胞膜破裂：將細胞以 0.2% Triton X-100 溶液覆蓋 20-30 分鐘，然後用蒸餾水輕輕沖洗 3 次。

3. 孵育與染色：將TRAP工作液加入細胞孔板中，覆蓋細胞，在37℃下避光孵育15-20分鐘，然後用蒸餾水洗滌3次。

4.（可選，自行配製試劑）核複染：吸乾培養液，用蘇木精染色液洗滌，進行核染色。

5. 加入適量的無水乙醇進行脫水，取出孔板中的蓋玻片，用吹風機吹乾，然後用中性樹膠將其倒置密封在乾淨的載玻片上。