完全性基因敲除 (Cas9-KO)

核心技術原理：

通過設計針對靶基因特異性的 gRNA，引導 Cas9 蛋白對 DNA 進行雙鏈切割，造成基因編碼區的移碼突變或片段缺失，從而完全阻斷蛋白質的表達。

特點與應用：

• 全身所有的組織和細胞中，該目標基因完全不表達。
• 適合用於探討該基因對全生理系統的基礎功能影響。

 

條件性基因敲除 (Cas9-cKO)

核心技術原理：

利用 Cre-LoxP 系統，在靶基因的關鍵外顯子兩側引入 LoxP 位點（Floxed 小鼠）。當其與特定組織特異性表達 Cre 酶的小鼠交配後，即可實現特定基因敲除。

特點與應用：

• 只在特定組織或特定時間點讓目標基因失活。
• 有效避免胚胎期致死，精準研究單一器官（如肝、腦、免疫）的病理機制。

 

嚴格的質量控制 (QC) 標準

• gRNA 高效篩選： 進行體外活性驗證，嚴格挑選切割效率最高的 gRNA，從源頭將脫靶率降到最低。
• 三引物 PCR 鑑定： 針對 F0 代與 F1 代小鼠進行嚴格的 3-primer PCR 基因型鑑定，清晰分辨野生型 (WT)、雜合子 (Het) 與純合子 (Homo)。
• Sanger 測序驗證： 對 PCR 產物進行測序，從鹼基序列級別確認切割位點、缺失片段或 LoxP 位點的插入完全正確。

 

當地交付與實驗對接標準 (Deliverables)

模式小鼠不進口回台，所有後續實驗與繁育直接於 Servicebio 當地一站式完美對接：

• 代養地陽性 F1 代小鼠： 於 Servicebio 專業代養場直接交付符合合約數量的健康 F1 代陽性雜合子小鼠，並直接就地轉入後續實驗流程。
• 完整技術報告： 提供權威《項目技術報告》，包含：靶基因打靶策略設計圖、gRNA 序列及引物資訊、PCR 基因型鑑定電泳圖、Sanger 測序比對結果報告，方便直接對接後續功能性實驗數據。