讓Servicebio成為您的WB實驗小幫手

WB真的是生命科學中研究蛋白質分子傳遞相關的重要實驗，但該注意且不可控的因素真的太多了!

我們上一片文章幫您整理了蛋白萃取的注意事項，這篇文章幫您介紹垂直電泳的注意事項喔!

一、實驗步驟

1. 玻璃與製膠相關配件清洗乾淨，用中性洗滌劑清洗厚薄玻璃板、齒梳、電泳槽槽體、電擊架，並用清水沖洗兩次，再用純水沖洗一次，自然晾乾或使用烘箱使其乾燥。

2. 配置上層膠以及下層膠體；依目標蛋白分子量和所選電泳緩衝液不同，選擇適當濃度的SDS-PAGE下層膠，參考表格如下：
這邊以Servicebio SDS-PAGE彩色凝膠超快速配製試劑組作為範本為您介紹製膠流程喔!

3. 依實驗需求，等比例混合對應的溶液A和B，加入適量的10% AP溶液，分別配製下層膠溶液、上層膠溶液。不同規格以及不同厚度的玻璃板可以等比例調整上層膠和下層膠溶液的配製體積，以常用規格約8.3 cm×7.3 cm 凝膠板和10% SDS-PAGE彩色(紅色)凝膠超快速配製試劑盒為例，推薦配製體系如下表格：

配製組別	組分	0 . 75 mm玻璃板	1.0 mm玻璃板	1.5 mm玻璃板
下層膠溶液	下層膠溶液A	2 mL	2.5 mL	4 mL
	下層膠溶液B	2 mL	2.5 mL	4 mL
	改良型促凝劑 (AP)	24 μL	30 μL	48 μL
上層膠溶液	上層膠溶液A	1 mL	1 mL	1.5 mL
	上層膠溶液B(紅或綠色)	1 mL	1 mL	1.5 mL
	改良型促凝劑(AP)	12 μL	12 μL	18 μL

4. 在兩塊玻璃板中間膠室中緩慢注入配製好的下層膠溶液注入兩片玻璃之間的三分之二到四分之三處（根據實際實驗需求來定），然後使用蒸餾水左右移動均勻加至膠室內，使其起到密封作用（加樣時請務必小心，避免產生氣泡）。靜置15-30 min左右等待凝膠聚合，倒出蒸餾水，並用吸水紙清理膠室殘留液體。

5. 使用配製的上層膠溶液加樣灌滿膠室（高度至凹板玻璃缺口上沿），隨後插入齒梳。等待約15-30 min凝膠完全聚合後，製膠即可完成。

注意事項:

A. 改良型促凝劑(AP) 可依室溫做調整，因為溫度高低會影響凝膠的速率。例如夏天溫度較高，自然凝膠速度較快，AP 的量需要適當的減少；冬天溫度低，凝膠慢，需要適量的增加。

B. 齒梳在插入玻璃前一定要清洗乾淨,因為環境中也是有蛋白酶的殘留，若清洗不完全會導致well中的蛋白降解快速導致後續實驗做不出來

C. 電泳梳子常用規格有：1.0mm和1.5mm兩種，分別分為10孔、11孔和15孔。齒梳厚度和玻璃板厚度需搭配。 1.5mm的梳子如果插在1.0mm的玻璃板上容易將玻璃板擠碎；1.0mm的梳子如果插在1.5mm 的玻璃板裡面，就會容易留殘膠。

二、垂直電常見問題與解決辦法